Biotechnologie — Vereisten voor het evalueren van de prestaties van kwantificeringsmethoden voor doelsequenties van nucleïnezuren — qPCR en dPCR (ISO 20395:2019)
Dit document bevat generieke vereisten voor het evalueren van de prestaties en het waarborgen van de kwaliteit van methoden die worden gebruikt voor de kwantificering van specifieke nucleïnezuursequenties (targets).Dit document is van toepassing op de kwantificering van DNA- (deoxyribonucleïnezuur) en RNA-doelsequenties (ribonucleïnezuur) met behulp van digitale (dPCR) of kwantitatieve real-time PCR (qPCR) amplificatietechnologieën. Het is van toepassing op doelsequenties die aanwezig zijn in nucleïnezuurmoleculen, waaronder dubbelstrengs DNA (dsDNA) zoals genomisch DNA (gDNA) en plasmide-DNA, enkelstrengs DNA (ssDNA), complementair DNA (cDNA) en enkelstrengs RNA (ssRNA) inclusief ribosomaal RNA (rRNA), messenger RNA (mRNA) en lang en kort niet-coderend RNA [microRNA' s (miRNA' s) en korte interfererende RNA' s (siRNA' s)], evenals dubbelstrengs RNA (dsRNA).Dit document is van toepassing op nucleïnezuren die zijn afgeleid van biologische bronnen zoals virussen, prokaryote en eukaryotische cellen, celvrije biologische vloeistoffen (bijv. plasma of celmedia) of in vitro bronnen [bijv. oligonucleotiden, synthetische genconstructen en in vitro getranscribeerd (IVT) RNA].Dit document is niet van toepassing op de kwantificering van zeer korte DNA-oligonucleotiden (< 50 basen).Dit document heeft betrekking op:— analytisch ontwerp, met inbegrip van kwantificatiestrategieën (kwantificering van het aantal nucleïnezuurkopieën met behulp van een kalibratiecurve zoals in qPCR of door middel van moleculaire telling zoals in dPCR, kwantificering ten opzichte van een onafhankelijk monster en verhoudingsmetingen) en gebruik van controles — kwantificering van de totale nucleïnezuurmassaconcentratie en kwaliteitscontrole van een nucleïnezuurmonster inclusief beoordeling van de nucleïnezuurkwaliteit (zuiverheid en integriteit) — PCR-testontwerp, optimalisatie, in silico en in vitro specificiteitstesten — controle en analyse van de gegevenskwaliteit, met inbegrip van acceptatiecriteria, vaststelling van drempels en normalisatie — validatie van methoden (precisie, lineariteit, bepaalbaarheidsgrens, detectiegrens, juistheid en robuustheid) met specifieke vereisten voor qPCR en dPCR — benaderingen voor het vaststellen van metrologische traceerbaarheid en het schatten van meetonzekerheid.Dit document geeft geen eisen of acceptatiecriteria voor het bemonsteren van biologisch materiaal of het verwerken van biologische monsters (d.w.z. verzameling, bewaring, transport, opslag, behandeling en extractie van nucleïnezuur). Het bevat evenmin eisen en acceptatiecriteria voor specifieke toepassingen (bijv. voedsel- of klinische toepassingen waarbij specifieke matrixproblemen kunnen optreden).
View in
