Determination of nucleic acid encapsulation efficiency in Lipid Nanoparticles using fluorometry
Ce document spécifie un protocole analytique standardisé pour la quantification de l' efficacité d' encapsulation de l' ARN et de l' ADN dans des nanoparticules lipidiques (LNP) par une méthode fluorimétrique. Cette méthode repose sur l' utilisation de colorants fluorescents interagissant sélectivement avec les acides nucléiques libres, permettant ainsi une distinction claire entre les espèces encapsulées et non encapsulées. Pour déterminer la teneur totale en acides nucléiques, les LNP sont lysées par un traitement détergent, permettant la libération complète du matériel encapsulé pour une mesure précise.Le protocole décrit ici offre une approche rapide, sensible et reproductible pour la quantification non destructive de l' efficacité d' encapsulation des acides nucléiques. Il pallie les limitations des techniques traditionnelles telles que l' électrophorèse sur gel et la spectroscopie UV, qui peuvent manquer de sensibilité et de spécificité.Ce document s' applique à la caractérisation des formulations de LNP utilisées pour l' administration d' acides nucléiques, notamment lors des phases de recherche et de développement précoce. Il est destiné aux laboratoires académiques, aux entreprises de biotechnologie et aux développeurs pharmaceutiques travaillant sur des systèmes à base de LNP pour des applications thérapeutiques. Le présent document se limite à la détermination analytique de l' efficacité d' encapsulation par fluorométrie. Il ne traite pas des aspects liés à la formulation des LNP, à leur caractérisation physico-chimique, à leurs performances in vivo ni à leur efficacité thérapeutique.
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